化學(xué)發(fā)光定氮儀的化學(xué)發(fā)光技術(shù)解析
點擊次數(shù)：2104 更新時間：2019-10-28
電化學(xué)發(fā)光是通過對電極施加一定的電壓進行電化學(xué)反應(yīng)而發(fā)光，通過測量化學(xué)發(fā)光光譜和強度來測定物質(zhì)含量的一種痕量分析方法。它將電分析化學(xué)手段和化學(xué)發(fā)光方法相結(jié)合，具有*的優(yōu)點，如重現(xiàn)性和靈敏度進一步提高，在多種組份同時存在時，可施加不同波形、不同電壓的信號進行選擇性測量等，是潛在的分析手段之一。
化學(xué)發(fā)光免疫分析是以標(biāo)記發(fā)光劑為示蹤物信號建立起來的一種非放射標(biāo)記免疫分析法，具有靈敏度高、線性范圍寬、儀器設(shè)備簡單、操作方便、分析速度快和容易實現(xiàn)自動化等優(yōu)點。魯米諾、異魯米諾及其衍生物、吖啶酯衍生物、辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶是目前化學(xué)發(fā)光免疫分析中使用多的標(biāo)記物。
微粒子化學(xué)發(fā)光是化學(xué)發(fā)光免疫分析的特殊形式，是以化學(xué)發(fā)光劑為底物的酶免疫技術(shù)，同時應(yīng)用了磁性微珠做固相載體，增加了吸附面積，使抗原抗體大限度的結(jié)合。以3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4- (3-磷氧酰)．苯基．1，2一二氧環(huán)乙烷(AMPPD)為發(fā)光底物在堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)的作用下，迅速去磷酸酶，生成不穩(wěn)定的中介體AMPPD-，進而產(chǎn)生激發(fā)態(tài)產(chǎn)物，當(dāng)其躍遷回到基態(tài)時產(chǎn)生光子。微粒子化學(xué)發(fā)光技術(shù)所需標(biāo)本量極少，孵育時間大大縮減，同時因其選擇性吸附抗原，從而提高了特異性、靈敏性，使測定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，并減少污染。
化學(xué)發(fā)光生物傳感器是通過非創(chuàng)傷或非損傷性的辦法，連續(xù)、實時、動態(tài)地檢測生物體內(nèi)的某一種或幾種物質(zhì)濃度的技術(shù)。該技術(shù)以化學(xué)發(fā)光作為換能器，不但繼承了化學(xué)發(fā)光高靈敏度的優(yōu)點，而且大大提高了化學(xué)發(fā)光的選擇性。按照所固定化的生物組分的種類，可以將化學(xué)發(fā)光生物傳感器分為酶傳感器、免疫傳感器、組織傳感器、核酸傳感器及微生物傳感器等。特別是化學(xué)發(fā)光免疫傳感器是將具有分子識別作用的抗原或抗體以適當(dāng)?shù)姆绞焦潭ɑ瞥桑Y(jié)合了化學(xué)發(fā)光高靈敏度和抗原抗體特異性結(jié)合的高度專一性以及無污染等特點，是替代放射免疫分析的重要分析工具，已日益受到重視。
化學(xué)發(fā)光核酸探針已用于檢查病毒、細菌和原蟲的DNA。以魯米諾增強化學(xué)發(fā)光檢測體系的核酸探針主要有兩種形式，一種是用生物素標(biāo)記探針，雜交后經(jīng)過分離，再以過氧化物酶標(biāo)記的親和素與生物素結(jié)合，加入魯米諾和增強劑后測發(fā)光。另一種是以過氧化物酶直接標(biāo)記探針，用增強的魯米諾檢測發(fā)光。核酸探針亦可用吖啶酯或AP來標(biāo)記，吖啶類發(fā)光體系發(fā)出的是瞬時光，而AP以AMPPD作為發(fā)光底物，其發(fā)光體系具有發(fā)光持續(xù)穩(wěn)定的特點，發(fā)光時間可長達幾天，既可用發(fā)光儀也能用簡單的感光膠片檢測。另外，AP-AMPPD發(fā)光體系具有非常高的靈敏度，無論是固相還是液相檢測，對標(biāo)記物堿性磷酸酶的檢測限可達10-21(<1000 AP分子)，是目前靈敏的核酸測定方法之一，已用于檢測B19微小病毒DNA、人乳頭瘤病毒DNA(HPV)．巨細胞病毒DNA(CMV)，并在DNA測序中有很好的應(yīng)用。
化學(xué)發(fā)光免疫分析是以標(biāo)記發(fā)光劑為示蹤物信號建立起來的一種非放射標(biāo)記免疫分析法，具有靈敏度高、線性范圍寬、儀器設(shè)備簡單、操作方便、分析速度快和容易實現(xiàn)自動化等優(yōu)點。魯米諾、異魯米諾及其衍生物、吖啶酯衍生物、辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶是目前化學(xué)發(fā)光免疫分析中使用多的標(biāo)記物。
微粒子化學(xué)發(fā)光是化學(xué)發(fā)光免疫分析的特殊形式，是以化學(xué)發(fā)光劑為底物的酶免疫技術(shù)，同時應(yīng)用了磁性微珠做固相載體，增加了吸附面積，使抗原抗體大限度的結(jié)合。以3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4- (3-磷氧酰)．苯基．1，2一二氧環(huán)乙烷(AMPPD)為發(fā)光底物在堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)的作用下，迅速去磷酸酶，生成不穩(wěn)定的中介體AMPPD-，進而產(chǎn)生激發(fā)態(tài)產(chǎn)物，當(dāng)其躍遷回到基態(tài)時產(chǎn)生光子。微粒子化學(xué)發(fā)光技術(shù)所需標(biāo)本量極少，孵育時間大大縮減，同時因其選擇性吸附抗原，從而提高了特異性、靈敏性，使測定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，并減少污染。
化學(xué)發(fā)光生物傳感器是通過非創(chuàng)傷或非損傷性的辦法，連續(xù)、實時、動態(tài)地檢測生物體內(nèi)的某一種或幾種物質(zhì)濃度的技術(shù)。該技術(shù)以化學(xué)發(fā)光作為換能器，不但繼承了化學(xué)發(fā)光高靈敏度的優(yōu)點，而且大大提高了化學(xué)發(fā)光的選擇性。按照所固定化的生物組分的種類，可以將化學(xué)發(fā)光生物傳感器分為酶傳感器、免疫傳感器、組織傳感器、核酸傳感器及微生物傳感器等。特別是化學(xué)發(fā)光免疫傳感器是將具有分子識別作用的抗原或抗體以適當(dāng)?shù)姆绞焦潭ɑ瞥桑Y(jié)合了化學(xué)發(fā)光高靈敏度和抗原抗體特異性結(jié)合的高度專一性以及無污染等特點，是替代放射免疫分析的重要分析工具，已日益受到重視。
化學(xué)發(fā)光核酸探針已用于檢查病毒、細菌和原蟲的DNA。以魯米諾增強化學(xué)發(fā)光檢測體系的核酸探針主要有兩種形式，一種是用生物素標(biāo)記探針，雜交后經(jīng)過分離，再以過氧化物酶標(biāo)記的親和素與生物素結(jié)合，加入魯米諾和增強劑后測發(fā)光。另一種是以過氧化物酶直接標(biāo)記探針，用增強的魯米諾檢測發(fā)光。核酸探針亦可用吖啶酯或AP來標(biāo)記，吖啶類發(fā)光體系發(fā)出的是瞬時光，而AP以AMPPD作為發(fā)光底物，其發(fā)光體系具有發(fā)光持續(xù)穩(wěn)定的特點，發(fā)光時間可長達幾天，既可用發(fā)光儀也能用簡單的感光膠片檢測。另外，AP-AMPPD發(fā)光體系具有非常高的靈敏度，無論是固相還是液相檢測，對標(biāo)記物堿性磷酸酶的檢測限可達10-21(<1000 AP分子)，是目前靈敏的核酸測定方法之一，已用于檢測B19微小病毒DNA、人乳頭瘤病毒DNA(HPV)．巨細胞病毒DNA(CMV)，并在DNA測序中有很好的應(yīng)用。